南京科维思生物科技有限公司

NGS科研用建库试剂盒
首页/产品与服务/ NGS科研用建库试剂盒

K02420-S/L   Balancer NGS Library Preparation Kit for small/microRNA – Illumina Compatible

流程介绍
      small/microRNA文库制备试剂盒能有效去除引物二聚体,并在同样数据量中获得更多种类的小RNA。具有单一试管反应、一天工作流程的特点。整个流程从总RNA开始,经过接头连接、反转录、PCR和切胶回收的过程,可构建适合Illumina测序仪的small/microRNA文库。通过优化实验流程,有效减少了接头的二聚体,可以从最少10ng 总RNA中成功完成文库构建,同时有效降低了连接反应的偏好性(bias),使得客户能够在同样的测序深度来发现更多的小RNA和microRNA,产生更好的科研发现。该产品可被广泛应用于分析各类临床样品(如FFPE样品和血清/血浆样本)的总RNA。
 
流程图
 
 
流程优势
• 更多地发现——有效去除连接偏好性(bias);
• 更优的数据质量——显著去除接头二聚体;
• 优化的实验流程——单管一天实验流程。
• 以总RNA作为起始反应物——无须进一步的纯化;
• 10ng总RNA便可进行;
• 可应用于血清和FFPE样品;
• 适合自动化操作。
 
产品信息

货号

产品名

规格

K02420-S

Balancer NGS Library Preparation Kit for small/microRNA – Illumina Compatible

12 rxn

K02420-L

Balancer NGS Library Preparation Kit for small/microRNA – Illumina Compatible

48 rxn

 
常见问题解答
1. 你们是否处理过血清样本,对于血清样本你们是否有什么建议?需要多少血清能够提取出足够建库的total RNA?
      我们处理过大量血清样本,有优化过的total RNA纯化的流程。通常0.5-1ml血清就可以得到建库足够的total RNA。当然,这也和血清样本的保存状况有关。
 
2. 你们的barcode序列在哪个位置?barcode有多少种?
      我们的barcode序列存在于PCR 引物上,有48种。
 
3. 在实验过程中比较重要的步骤是哪几个步骤?
      只要样本中存在小RNA,按照我们的protocol操作一般是不会出现问题的。需要注意的只有一点:我们建议大家在建库时做一个不加样本的负对照,这样可以清晰的观察到小RNA的条带电泳的位置,并和可能产生的引物二聚体区分,这样不会错误回收引物二聚体片段。胶尽量跑远,割胶前后都要照相。不只一条条带时分别切胶回收等也都是减少无用数据的方法。
 
4. 你们两端的接头加起来长度是多少?所切的片段大小是多少?
      micro RNA试剂盒5’和3’接头加起来长度是118bp。在切胶回收的时候,会切取140bp-160bp之间的片段。建议做阴性对照,这样可以清楚的识别出所需要的小RNA。
 
5. 在高通量测序中,小RNA 建库过程中是通过什么方式来减少引物二聚体的形成的?
      这是我们小RNA文库制备的试剂盒的另一个主要优势:在小RNA与3’接头连接后,加入RT-primer。RT- primer可以与3’接头互补结合,形成RNA:DNA双链杂合体。这些双链杂合体不能作为RNA连接酶的底物,和后期加入的5’接头连接,从而减少了引物二聚体的形成。
 
6. 在高通量测序中,小RNA 建库过程中怎么去除mRNA及rRNA的?在哪步去除?
      小RNA 建库过程中mRNA和rRNA不需要去除,因为它们不干扰整个反应。在小RNA 接头连接的时候,所用的RNA连接酶对于长的片段的连接效率低,两端同时连上接头的品种大多数是小RNA。少数掺入的mRNA或rRNA会因分子量的不同,在根据片段长度切胶纯化的过程中,自然而然地去除了。如果mRNA存在降解,并且降解的mRNA条带在小RNA条带附近,在测序结果中会看到这些降解mRNA的存在。
 
7. 在高通量测序中,small RNA文库构建是怎么解决序列偏好性(bias)的?
      这是我们小RNA文库制备的试剂盒的主要优势之一:在5’接头的连接序列处序列进行了调整,有效去除了序列偏好性。在相同的数据量下,可以找到更多种类的小RNA,去发现别的技术可能丢失的信息。
 
8. 在高通量测序中,small RNA 文库构建是从total RNA起始的吗?一般 total RNA 需要的量是多少?最低起始量是多少?
      small RNA 文库构建是从total RNA起始的。在建库中,一般total RNA的用量是1ug,最低起始量是10ng。small RNA 建库的关键之处是提取的RNA中是否有small RNA,及含有的small RNA 的多少。不同物种不同样品提取的small RNA的含量都不同,一般情况下,样品起始量为1ug total RNA,PCR进行12个循环。
 

南京市江宁区秣周东路12号紫金(江宁)悠谷

联系电话: 025-83463509(市场部)
     025-83465509(人事部)
     025-86138126(财务部)
     18013040243(数字pcr渠道合作)

产品订购:Sales@questgenomics.com

技术支持:Support@questgenomics.com