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NGS科研用建库试剂盒
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M02421T-S/L RNA Seq Library Preparation Kit for Transcriptome Discovery – Ion Torrent Compatible

 流程介绍
      科维思IonTorrent平台RNA文库构建试剂盒是市场上多个方向性RNA文库构建试剂盒 中方向性最好,流程最简单的产品。该产品实现自动化兼容,6 小时即可完成整个实验流程。 结合 IonTorrent 平台的测序速度优势,本产品提供了一种应用于快速临床检测的可能。通过 舍弃额外的步骤,我们成功地降低了 mRNA 样品建库的初始量,可用于 FFPE 样品的 RNA 文库构建。
 
流程图
 
 
产品优势

• 最好的方向性-保留95%以上方向性信息;
• 
简单的流程-舍弃了第二条cDNA链的合成和3‘接头连接;

• 低初始量-低至1ngmRNAFFPE样品提取的mRNA

• 快速的测序周期:单管反应,整个建库仅需6小时,提供临床科研应用的可能。


产品信息

货号

产品名

规格

M02421T-S

 RNA Seq Library Preparation Kit for Transcriptome Discovery-Ion Torrent Compatible

12 rxn

M02422T-L

 RNA Seq Library Preparation Kit for Transcriptome Discovery-Ion Torrent Compatible

48 rxn

 
常见问题解答
1. Ion Torrent 平台的RNA转录组建库流程和Illumina平台相比有什么不同?
      Ion Torrent 平台的RNA转录组建库流程和Illumina平台的共同点在于:有很好的方向性,流程简单,自动化兼容。不同的是:Ion Torrent平台的 barcode共有12个,位于RNA方向性文库的5’端,通过连接5’adaptor连接上去的。
 
2. 在RNA转录组建库流程中用到Gnome Size Selector的原理及用途?
      在RNA转录组建库流程中3次用到Gnome Size Selector。第一次是在RNA5’接头连接之后,是RNA水平的size selection。目的是去除未连接的5’接头,并进行缓冲液的置换。第二次是在第一链cDNA合成之后,是单链cDNA的size selection。目的是去除多余的RT primer,并进行缓冲液的置换。第三次是对PCR产物进行分子量区间的筛选,是更常规意义上的size selection。
      Gnome Size Selector用于RNA及单链cDNA的纯化,是Gnomegen在使用上的创新。使得RNA文库构建的简单流程成为可能。
 
3. RNA断裂的大致片段区间是多少?
      在我们提供的断裂体系中,95度5min断裂的片段大小大概在100-700nt。其中主要片段分布在300-500nt。对分子量区间有其它要求的用户请联系技术支持。
 
4. RNA转录组样品制备试剂盒可以用来做降解组实验吗?在操作流程上的差别在哪?
      可以。我们已经将流程进行了调整,正在积累数据的阶段。在时机成熟的时候会有新产品上市。有兴趣的客户可以联系技术支持得到更多信息。
 
5. RNA转录组样品制备,PCR需要多少个循环?
      PCR循环数与样品起始量,及整个流程操作下来RNA的收率有关,不同的人结果不同,所以在做PCR时需要进行一个条件摸索。一般条件下如果是10ng左右的起始mRNA建议做12-15个循环。
 
6. RNA转录组样品制备流程中关于温度的控制一般在什么仪器上进行?
      建议在PCR仪上进行,这样有利于温度的控制。
 
7. RNA转录组样品制备是否有方向性?接头是怎么加的?
      RNA转录组文库构建是有方向性的。在被断裂的RNA5’端加上接头,在合成第一链cDNA的时候通过逆转录引物引入另一个接头。这样生成的第一链cDNA的两端各有一个接头,mRNA序列对应的5’和3’接头序列是不一样的。所以测序得到的结果可以知道序列的走向。
 
8. RNA转录组样品制备,整个流程需要多长时间?原因是为什么?
      RNA转录组样品制备步骤简单,耗时少,只需要6个小时即可完成。主要步骤为RNA断裂,5’接头的连接,第一条cDNA的逆转录和PCR扩增及纯化。因为减少了第二条cDNA链的生成和下游DNA文库的构建,所以流程大大缩短。
 
9. 高通量测序RNA 转录组样品制备是从Total RNA 起始还是从mRNA起始?如果从mRNA起始,试剂盒中包含提取mRNA的试剂吗?
      RNA 转录组样品制备是从mRNA起始的,本公司试剂盒中不包含提取mRNA的试剂。建议大家使用SeradynOligo d(T)(货号:2815-2103-011150)的磁珠,进行两次纯化。
 

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