• 最好的方向性－保留95%以上方向性信息；
• 简单的流程-舍弃了第二条cDNA链的合成和3‘接头连接；
• 低初始量-低至1ng的mRNA或FFPE样品提取的mRNA；
• 快速的测序周期：单管反应，整个建库仅需6小时，提供临床科研应用的可能。
常见问题解答
1. Ion Torrent 平台的RNA转录组建库流程和Illumina平台相比有什么不同？
Ion Torrent 平台的RNA转录组建库流程和Illumina平台的共同点在于：有很好的方向性，流程简单，自动化兼容。不同的是：Ion Torrent平台的 barcode共有12个，位于RNA方向性文库的5’端，通过连接5’adaptor连接上去的。
2. 在RNA转录组建库流程中用到Gnome Size Selector的原理及用途？
在RNA转录组建库流程中3次用到Gnome Size Selector。第一次是在RNA5’接头连接之后，是RNA水平的size selection。目的是去除未连接的5’接头，并进行缓冲液的置换。第二次是在第一链cDNA合成之后，是单链cDNA的size selection。目的是去除多余的RT primer，并进行缓冲液的置换。第三次是对PCR产物进行分子量区间的筛选，是更常规意义上的size selection。
Gnome Size Selector用于RNA及单链cDNA的纯化，是Gnomegen在使用上的创新。使得RNA文库构建的简单流程成为可能。
3. RNA断裂的大致片段区间是多少？
在我们提供的断裂体系中，95度5min断裂的片段大小大概在100-700nt。其中主要片段分布在300－500nt。对分子量区间有其它要求的用户请联系技术支持。
4. RNA转录组样品制备试剂盒可以用来做降解组实验吗？在操作流程上的差别在哪？
可以。我们已经将流程进行了调整，正在积累数据的阶段。在时机成熟的时候会有新产品上市。有兴趣的客户可以联系技术支持得到更多信息。
5. RNA转录组样品制备，PCR需要多少个循环？
PCR循环数与样品起始量，及整个流程操作下来RNA的收率有关，不同的人结果不同，所以在做PCR时需要进行一个条件摸索。一般条件下如果是10ng左右的起始mRNA建议做12-15个循环。
6. RNA转录组样品制备流程中关于温度的控制一般在什么仪器上进行？
建议在PCR仪上进行，这样有利于温度的控制。
7. RNA转录组样品制备是否有方向性？接头是怎么加的？
RNA转录组文库构建是有方向性的。在被断裂的RNA5’端加上接头，在合成第一链cDNA的时候通过逆转录引物引入另一个接头。这样生成的第一链cDNA的两端各有一个接头，mRNA序列对应的5’和3’接头序列是不一样的。所以测序得到的结果可以知道序列的走向。
8. RNA转录组样品制备，整个流程需要多长时间？原因是为什么？
RNA转录组样品制备步骤简单，耗时少，只需要6个小时即可完成。主要步骤为RNA断裂，5’接头的连接，第一条cDNA的逆转录和PCR扩增及纯化。因为减少了第二条cDNA链的生成和下游DNA文库的构建，所以流程大大缩短。
9. 高通量测序RNA 转录组样品制备是从Total RNA 起始还是从mRNA起始？如果从mRNA起始，试剂盒中包含提取mRNA的试剂吗？
RNA 转录组样品制备是从mRNA起始的，本公司试剂盒中不包含提取mRNA的试剂。建议大家使用SeradynOligo d（T）（货号：2815-2103-011150）的磁珠，进行两次纯化。
